アクティブボード・２０１３年　２月
　　　　　・・・・・２０１３年　２月　２日更新・・・・・

研究発表を行った学会；
・第３５回日本分子生物学会年会
　２０１２年１２月１１日〜１４日（福岡）

タイトル；Danforth’s short tail (Sd)マウスのゲノム変異と原因遺伝子領域の決定.

発表者；仙波　圭　氏
　　　（熊本大学　生命資源研究・支援センター　疾患モデル分野）
Abstract；
　Danforth’s short tail (Sd)変異マウスは、脊椎欠損、鎖肛、腎臓欠損を呈し、ヒトのCaudal regressionのモデルである。今回、我々の研究グループによりSdの原因ゲノム変異と遺伝子領域を同定したので報告する。我々の研究グループは、Sd変異のゲノム解析のために、Sdホモ接合体のゲノムを使用したコスミドライブラリーを作製してスクリーニングを行い、Sd候補ゲノム領域のコスミドコンティグ(542kb)を作製した。興味深いことに候補ゲノム領域内のあるコスミドクローンのインサートサイズが予想サイズより大きいことが判明した。このクローンに対してショットガンシークエンス/ゲノムアッセンブリーを行った結果、8,497bpのサイズを持つトランスポゾン(ETn)が挿入されていたことが判明した。これは、隣接するゲノムをプローブとしてSdゲノムに対して行ったサザンハイブリダイゼーションの結果によっても裏付けられた。我々はこのETnの挿入がSdのゲノム変異の有力候補と判断した。また、Sd変異胚内でETnに隣接する４種類の転写産物; Gm13344 (BQ), Gm13336 (AK), AKとETnとの融合転写産物(mutant AK), Ptf1aの発現が上昇していることがわかった。続いて、WT-ES細胞の挿入部位にクローニングしたETnを挿入する実験を行った。するとETnが挿入されたWT-ES細胞より作出した変異マウスがSd表現型である脊椎、腎臓、肛門の発生異常を呈した。このことは、ETn挿入がSdの原因変異であることを強く示している。また、Sd表現型の原因遺伝子領域を決定するために、ETnが挿入されているゲノム領域(36,440bp)の全長領域、BQとETn挿入変異を含む領域、AK/Ptf1aとETn挿入変異を含む領域の３つのゲノム断片にわけてゲノムトランスジェニックマウス(Tg)を作出したところ、全長ゲノム領域とAK/Ptf1aとETn挿入変異を含む領域のゲノム断片より作出したTgマウスがSdの表現型を示した。この結果は、AK/Ptf1a領域がSdの原因遺伝子領域であることを強く示唆した。