アクティブボード・２０１２年　６月
　　　　　・・・・・２０１２年　６月　５日更新・・・・・

研究発表を行った学会；
・日本実験動物科学・技術 九州 2012
　２０１２年　５月２４日〜２６日（別府）

タイトル；英国Medical Research Council Harwell で作製されたマウス凍結精子を用いた体外受精.

発表者；吉本　英高　氏
　　　（熊本大学　生命資源研究・支援センター　資源開発分野）
Abstract；
【目的】現在、マウスバンクにおいて、多くの遺伝子改変マウスの精子が凍結保存されている。しかしながら、遺伝子改変マウスの作製に汎用されている、C57BL/6マウスの凍結/融解精子は、顕著に受精能が低下することが知られている。そこで私達は、C57BL/6マウスの凍結/融解精子における受精能改善を目指して、研究を進めてきた。その結果、精子凍結保存液におけるL-グルタミンの凍結保護作用、精子前培養培地におけるメチル-b-シクロデキストリン（MBCD）の精子に対する受精能賦活作用、および体外受精培地における還元型グルタチオン（GSH）の卵子に対する受精促進作用を用いることにより、C57BL/6マウスの凍結/融解精子の低受精能を劇的に改善することに成功している。しかしながら、世界各国のマウスバンクにおいて、様々な精子の凍結保存法および体外受精法が利用されており、C57BL/6マウスの凍結/融解精子における低受精能の問題は依然として残っている。そこで本研究では、海外で作製されたC57BL/6マウスの低受精能の克服を目指し、ヨーロッパを代表するマウスバンクであるMedical Research Council (MRC) Harwell（イギリス）で作製されたC57BL/6マウスの凍結精子を用いて、私達が開発した体外受精法（CARD法）により受精率の改善が認められるかを評価した。
【方法】MRC Harwell にて作製されたC57BL/6マウスの凍結精子を当施設に輸送し、本実験に使用した。体外受精では、過排卵処理したC57BL/6の雌マウスから採取した卵子をHTFあるいは1.0 mMGSHを含有するHTF中に導入した。また、凍結/融解精子は0.75 mM MBCDを 含有したTYH中で前培養した後に、受精培地に導入し体外受精を行った。翌日、二細胞期胚 をカウントし、受精率を算出した。
【結果および考察】CARD法により、MRC Harwelｌにおいて作製された凍結/融 解精子において高い受精率が得られることが明らかになった。特に、GSHは、高い受精促進効果を示した(control at 0 mM: 40% vs. 1.0 mM: 77%)。以上の結果から、海外で作製されたマウス凍結精子に対しても、CARD法を用いることにより、高い受精率が得られることを明らかにした。本知見は、海外のマウスバンクから輸送される凍結精子から、CARDにより安定して受精卵を作製できることを明らかにし、海外から凍結精子の輸送を利用した遺伝子改変マウスの授受が可能であることを示すものである。